13. Průkaz glykogenu.
Zenkerova tekutina, příprava a použití
Průkaz glykogenu
- Glykogen je polysacharid, který se dá rozštěpit pomocí enzymů - amylázy, diastázy a ptyalinu (tyto enzymy jsou přítomny také ve slinách)
Na průkaz glykogenu se používá PAS reakce s kontrolou
1) Deparafinace (X1, X2, A1, A2) – 5 minut, oplach ve vodě – 5 minut
2) Kontrolní řez se nechá inkubovat při pokojové teplotě v 1% roztoku diastázy – 30 minut, místo diastázy lze použít slin, vyprat dobře v dest. vodě
3) PAS reakce s dobarvením Hurisovým hematoxylinem
4) Odvodnění (A1, A2, KX); projasnění (X1, X2); montování
VÝSLEDEK BARVENÍ
pokud sacharid, který je ve tkání, je glykogen - je PAS reakce na pokusném řezu negativní a na kontrolním řezu pozitivní, protože se glykogen v pokusném řezu rozštěpil enzymem
pokud je ve tkáni jiný sacharid než glykogen, je PAS reakce na obou řezech pozitivní (ve tkáni se nachází nějaký diastázorezistentní polysacharid)
Zenkerova tekutina
Sublimát + síran sodný + dvojchroman draselný + dest. voda
Před použitím na 100ml přidat 5ml ledové kyseliny octové
Zenkerova tekutina má sytě oranžovohnědou barvu, kterou způsobuje dvojchroman draselný, způsobuje silné zabarvení tkáně, proto se tkáň po fixaci propírá v tekoucí vodě v promývací nádobce (24 hodin)
Po vyprání se tkáň vkládá do 70 % alkoholu, ve kterém se provádí jodování - jodováním se z tkáně odstraní sublimátové sraženiny (jodování je možné provádět hned po fixaci - jodování v bločku, nebo až při deparafinaci v poslední lázni alkoholu - jodování v řezech - trvá jen několik minut)
Postup jodování:
Sublimát se v tkáni ukládá jako nerozpustná sraženina, odstraňuje se pomocí jodové tinktury nebo Lugolova roztoku. Jod se váže na sublimát a tvoří s ním rozpustnou látku, která přechází do roztoku. Pokud je ve tkáni sublimát, reaguje s ním jod a roztok se odbarvuje, pokud již ve tkáni není sublimát, roztok se obarví jodem.
Žádné komentáře:
Okomentovat