4. Barvení modrým trichromem. Zalévání do celoidinu, postup a použití

4. Barvení modrým trichromem.
Zalévání do celoidinu, postup a použití

Barvením modrým trichromem
- přehledná barvící metoda, slouží k odlišení kolagenního vaziva

1) Deparafinace (X1, X2, A1, A2) – 5 minut, oplach ve vodě – 5 minut
2) Weigertův železitý hematoxylin (A = 1% hematoxylin v 96% alkoholu, B = dest. voda, chlorid železitý, HCl -> A+B=1:1) 3 – 10 minut, oplach vodou, po obarvení není nutné diferencovat, pouze pokud došlo k přebarvení tkáně, k diferencování používáme kyselý alkohol, pokud diferencujeme důkladně propíráme ve vodě
3) Roztok červeně (směs červených barviv - oranž G, kyselý fuchsin) – 1-3 minuty, oplach v dest. vodě
4) Moření 1% kyselinou fosfomolibdenovou (moření podporuje barvitelnost kolagenních vláken) – 3 – 5 minut
5) Bez oplachu anilinová modř – 5 minut, oplach v dest. vodě
6) Diferencování v 1% kyselině octové
7) Odvodnění (A1, A2, KX); projasnění (X1, X2); montování

VÝSLEDEK BARVENÍ
Jádra – modře až hnědočerně
Kolagenní vazivo – modře
Svalstvo – červeně

Zalévání do celoidinu, postup a použití
Celoidin je tvrdé zalévací médium nerozpustné ve vodě.
- je to nitrát celulózy, suchý celoidin má vatovou strukturu - proceloidin, před použitím se musí rozpustit alkoholetherem na 10 % koncentraci
- proceloidin je výbušnina, nesmí se pracovat s otevřeným ohněm

POSTUP:
1) Fixace
- používá se jakákoliv fixační tekutina, kromě Buenovy tekutiny, protože kyselina pikrová v ní obsažená, brání pronikání celoidinu do tkáně

2) Odvodňování tkáňového bločku
- řadou alkoholů se stoupající koncentrací
70% - 2 hodiny
80% - 4-6 hodin
96% - 6 hodin
100% - 3x 2 hodiny

3) Prosycování rozpouštědlem celoidinu
- rozpouštědlem celoidinu je alkoholether ( směs absolutního alkoholu a etheru v poměru 1 : 1 )
- provádí se v dobře uzavřené nádobě, při pokojové teplotě 8 - 12 hodin

4) Prosycování tkáně celoidinem
- tkáň se prosycuje třemi koncentracemi celoidinu ( 2,5 % , 5 % a 10 % )
- provádí se v dobře uzavřené nádobce, aby neunikal ether, tím by se zvyšovala koncentrace a mohl by vzniknout až suchý celoidin
a) prosycování 2,5 % celoidinem - 24 hodin - 3 dny
b) prosycování 5 % celoidinem - 3 - 7 dní
c) prosycování 10 % celoidinem - 1 - 4 týdny

5) Vlastní zalití do celoidinu
- do skleněné nádobky s plochým dnem nalijeme 10 % celoidin
- celoidinu musí být dostatečné množství protože při tuhnutí se jeho objem snižuje až o polovinu
- bloček zalitý do celoidinu přeneseme do nádobky - řeznou plochou na dno
- nejprve nádobku na několik hodin uzavřeme, aby mohli unikat bublinky
- poté ji mírně pootevřeme a necháme pomalu unikat ether, aby celoidin tuhl rovnoměrně
- zalévání se provádí v exsikátoru, kde je hygroskopická látka, aby se celoidin nemísil s vodou
- po ztuhnutí celoidinu se vykrojí celoidinový bloček, který se ukládá v 70 % alkoholu, aby nevysychal

6) Krájení
- krájí se na sáňkovém mikrotomu, šikmo nastaveným nožem
- při krájení se potírá v 70 % alkoholem, ve kterém se ukládají také řezy
Použití
- běžně se nepoužívá, protože doba zalévání je příliš dlouhá
- používá se pro zalévání tvrdých tkání (zub, kost, zvápenatělá chrupavka, šlacha), tyto tkáně by se špatně krájely v parafinu.