20. Krájení, napínání a lepení parafinových řezů. Zalévací média rozpustná ve vodě – přehled a použití

20. Krájení, napínání a lepení parafinových řezů.
Zalévací média rozpustná ve vodě – přehled a použití

Krájení, napínání a lepení parafinových řezů
- Krájení
Může se provádět na rotačním i sáňkovém mikrotomu.

- Napínání a lepení
• Pomocí teplé destilované vody
do nádobky nalijeme teplou destilovanou vodu a na její hladinu položíme ukrojený řez; poté pomocí preparační jehly upevníme napnutý řez na podložní sklíčko natřené lepicí směsí; takto upravené řezy vložíme na 24 hodin do termostatu nastaveného na 37 - 40 °C
• Pomocí elektrické ploténky
na podložní sklíčko potřené lepicí směsí dáme kapku studené destilované vody, na kapku položíme ukrojený řez a sklíčko položíme na vyhřívanou ploténku; parafin se zahřívá pomalu, proto je napínání důkladnější, napínáme pomocí preparační jehlou; po vypnutí vložíme do termostatu
Lepení parafinových řezů je založeno na denaturaci bílkovin, přítomných v lepicí směsi, při vyšší teplotě 37-40°C (proto po napnutí vkládáme do termostatu)


Zalévací média rozpustná ve vodě – princip a použití
Média rozpustná ve vodě se dělí na měkká (želatina) a tvrdá (celodal).
- Želatina
želatina je měkké zalévací médium rozpustné ve vodě
používá se pro zalévání řídkých tkání, které chceme zpevnit, nebo pokud tkáň chceme uchovat delší dobu
želatina vytěsní z tkáně vodu, která je mezi buňkami
prosycení tkáňového bločku vypraného ve vodě postupně v koncentrátu želatiny při 37°C, pak se bloček zchladí, želatina ztuhne a bloček se stvrdí ve formolu, krájí se na zmrazovacím mikrotomu

POSTUP:
1) tkáňové bločky fixujeme formolem, vypereme v tekoucí vodě – 24 hodin
2) prosycování 10% roztokem želatiny při teplotě 37°C – 2 – 4 hodiny
3) prosycování 20% roztokem želatiny při 37°C – 4 – 6 hodin
4) zalití bločku do 20% roztoku želatiny do kovové nebo papírové krabičky
5) želatinu necháme ztuhnout
6) tvrzení želatinových bločků ve 20% formolu – 24 hodin
7) praní želatinových bločků ve vodě a krájení na zmrazovacím mikrotomu

Příprava roztoku želatiny
Roztok 10% - 20% želatiny se připraví rozpuštěním odváženého množství želatiny; želatinu necháme 15 minut zbobtnat a pak rozpustíme ve vodní lázni nebo termostatu za účelem konzervace přidáme krystalek thymolu.